REGENERASI ANAKAN RUMPUT LAUT HASIL TRANSFORMASI GEN Metallothionin TYPE II PADA RUMPUT LAUT Kappaphycus alvarezii MENGGUNAKAN MEDIA YANG BERBEDA

Abstract

Transformasi gen metallothionin (Mamt) type II pada rumput laut Kappaphycus alvarezii telah berhasil dilakukan melalui mediasi Agrobacterium tumefacien, diinokulasi dengan bakteri yang mengandung plasmid PlG6 yang membawa gen MaMt2 melalui seleksi bertingkat menggunakan hygromisin 10 dan 20 ppm, dengan efisiensi transformasi dalam K. alvarezii pada media seleksi I adalah 82,07%, dan pada media seleksi II adalah 84,21%, dengan efisiensi regenerasi tunas transgenik pada K. alvarezii adalah 98,43%. Evaluasi gen MaMt2 pada anakan rumput laut dilakukan melalui analisis PCR di bawah kendali promotor ubiquitin dan nos terminator. Regenerasi anakan rumput laut hasil transformasi gen MaMt2 dilakukan pada media cair yang diperkaya dengan pupuk PES, Conwy,Grund dan SSW (kontrol), pada salinitas 30 ppt, dengan pH berkisar 6-8, untuk memacu pertumbuhan tunas, media diperkaya dengan IAA dan BAP dengan perbandingan 1:1, 1:2, dan 2:1. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melihat potensi regenerasi anakan hasil transformasi gen MaMt2 menggunakan media yang berbeda serta keberadaan gen MaMt2 pada anakan rumput laut hasil transformasi. Hasil analisis memperlihatkan media yang paling baik digunakan adalah media PES dengan sintasan mencapai 94%, walaupun tidak berbeda dengan media Grund (82%), berbeda dengan SSW dan Conwy. pH optimal untuk regenerasi anakan rumput laut adalah pada pH 6, dan laju pertumbuhan harian yang paling tinggi pada media yang diperkaya dengan campuran IAA dan BAP dengan perbandingan 1:2. Hasil analisis PCR memperlihatkan band pada 500 kb menunjukkan keberadaan gen MaMt2 pada anakaan rumput laut hasil transformasi.