KLONING PROMOTER -ACTIN IKAN MAS MAJALAYA DALAM Escherichia coli

Abstract

Peranan promoter sangat penting dalam upaya pengembangan teknologi transgenik pada ikan mas Majalaya karena merupakan elemen pengatur aktivitas transkripsi untuk ekspresi transgen. Promoter b-actin memiliki aktivitas ekspresi tinggi pada hampir semua sel ikan. Amplifikasi sekuen promoter b-actin mas Majalaya dengan PCR menghasilkan ukuran fragmen DNA sebesar 1.126 bp menggunakan primer F (5’ – GATGAAACTCGAGTAGCCCTTGCTCTTC– 3’) dan primer R (5’ –CGTTCGAATTGATATATGCGAGCTG– 3’). Purifikasi

produk PCR tersebut juga menghasilkan ukuran fragmen DNA yang sama. Hasil insersi fragmen promoter b- actin mas Majalaya dapat berintegrasi dengan plasmid pGEM-T, yang menunjukkan terbentuknya plasmid rekombinan, dengan ditandai tumbuhnya koloni transforman berwarna putih, dan koloni berwarna biru tidak mengandung DNA sisipan. Elektroforegram hasil isolasi plasmid rekombinan untuk transforman koloni putih menunjukkan adanya DNA sisipan (fragmen promoter b-actin mas Majalaya) dan koloni biru tidak mengandung DNA sisipan (tidak ada fragmen DNA b-actin mas Majalaya). Ukuran fragmen DNA insert dari hasil isolasi plasmid pada sel transforman koloni putih sebesar 1.126 bp dan tidak jauh berbeda dengan ukuran fragmen promoter b-actin Cyprinus carpio sebesar 1.123 bp, mud carp sebesar 1.127 bp dan pada Silver carp sebesar 1.123 bp.